Äæת¼PCR

Äæת¼ÊÇÖ¸ÒÔRNAΪģ°åºÏ³ÉÓëÆ以²¹µÄcDNAµÄ¹ý³Ì¡£Äæת¼PCRÊǽ«RNAµÄÄæת¼(reverse transcription) ºÍcDNAµÄ¾ÛºÏøÁ´Ê½·´Ó¦(PCR)Ïà½áºÏµÄ¼¼Êõ£¬¹ÊÄæת¼³ÆΪRT-PCR»ò·´×ªÂ¼PCR¡£Äæת¼PCRʵÑéÔ­ÀíÊÇ£¬ÌáÈ¡×éÖ¯»òϸ°ûÖеÄ×ÜRNA£¬ÒÔRNAΪģ°å£¬ÀûÓÃÄæת¼ø·´×ªÂ¼³ÉcDNA£¬ÔÙÒÔcDNAÁ´ÎªÄ£°å½øÐÐPCRÀ©Ôö£¬´Ó¶ø»ñµÃ´óÁ¿¿½±´¡£Äæת¼PCRµÄ³öÏÖʹRNA¼ì²âµÄÁéÃôÐÔÌá¸ßÁ˼¸¸öÊýÁ¿¼¶£¬Ê¹Ò»Ð©¼«ÎªÎ¢Á¿RNAÑùÆ··ÖÎö³ÉΪ¿ÉÄÜ¡£

Äæת¼PCRÓ¦ÓÃ

Äæת¼PCRµÄÓÃ;¹ã·º£¬¿ÉÓÃÓÚ·ÖÎö»ùÒòµÄת¼²úÎï¡¢¼ì²âϸ°ûÖÐRNA²¡¶¾µÄº¬Á¿¡¢ºÏ³ÉcDNA̽Õë¡¢Ö±½Ó¿Ë¡Ìض¨»ùÒòµÄcDNAÐòÁеÈ¡£ÈçÔÚÁÙ´²ÉÏRT-PCR¿ÉÒÔÓÃÓÚÒÅ´«²¡Õï¶Ï¡¢°©Ö¢¼ì²â¡¢¼ì²â²¡È˱걾ÖеÄRNA²¡¶¾£¬ÈçHAV¡¢HCR¡¢HIVµÈ¡£ÔÚÖ²Îï·½ÃæRT-PCR³£ÓÃÓÚÑо¿»·¾³Ð²ÆȶÔÖ²Îï»ùÒò±í´ïµÄÓ°Ï죬ÒÔ¼°ÔÚÌض¨µÄ»·¾³»òÉú³¤½×¶ÎÖÐÖ²ÎïÌ岻ͬ²¿Î»»ùÒò±í´ïµÄ²îÒìÐÔ¡£Ê¹ÓÃRT-PCR¼ì²â·ÖÎöRNAת¼²úÎï¾ßÓÐÒÔÏÂÍ»³öµÄÓŵ㣺

  • ÀíÂÛÉÏ¿ÉÒÔ¼ì²â¼¸ºõÈκλùÒòµÄת¼²úÎ
  • ¿ÉÒÔʵÏÖ¼«ÎªÎ¢Á¿RNAÑùÆ·£¨ng¼¶±ð£©µÄ¼ì²â£»
  • ÑùÆ·ÄÍÊÜÐԺã¬Î´¾­´¿»¯µÄ´ÖÖÆÉúÎïÑùÆ·Ò²¿ÉÒÔÓÃÓÚ¼ì²â£»

Ä£°å

Äæת¼PCRµÄÄ£°åÊÇRNA£¬¿ÉÒÔÊÇ×ÜRNA¡¢mRNA»òÌåÍâת¼µÄRNA²úÎï¡£ÎÞÂÛʹÓúÎÖÖRNA£¬¶¼ÐèÈ·±£RNAÖÐÎÞRNAøºÍ»ùÒò×éDNAµÄÎÛȾ¡£

RNAÌáÈ¡

¿ÉÒÔÀûÓÃÊÔ¼ÁºÐ´Óϸ°û£¨»ò×éÖ¯£©ÖÐÌáÈ¡µÃµ½RNA¡£Ä£°åRNAµÄ´¿¶ÈºÍÍêÕûÐÔ¶ÔÓÚÀ©ÔöµÄ½á¹ûÓкܴóÓ°Ï죬´Óϸ°ûÖзÖÀëRNAӦעÒ⾡Á¿¼õÉÙRNAøµÄÎÛȾ£¨RNAø·Ö²¼¹ã·º£¬³ýϸ°ûÄÚÔ´ÐÔRNAøÍâ»·¾³ÖÐÒ²´æÔÚ´óÁ¿RNAø£©£¬ÔÚÌáÈ¡RNAʱ£¬Ó¦¾¡Á¿´´ÔìÒ»¸öÎÞRNAøµÄ»·¾³£º±ÜÃâRNAøÎÛȾ°üÀ¨È¥³ýÍâÔ´ÐÔRNAøÎÛȾºÍÒÖÖÆÄÚÔ´ÐÔRNAø»îÐÔ£¬Ö÷ÒªÊDzÉÓý¹Ì¼Ëá¶þÒÒõ¥£¨DEPC£©È¥³ýÍâÔ´ÐÔRNAø£¬Í¨¹ýRNAøµÄ×èÒÖµ°°×RnasinºÍÇ¿Á¦µÄµ°°×ÖʱäÐÔ¼ÁÒÖÖÆÄÚÔ´ÐÔRNAø¡£

ÒýÎï

ÓÃÓÚ·´×ªÂ¼µÄÒýÎïÓÐËæ»úÒýÎͨÓÃÒýÎOligo-dT£©¼°»ùÒòÌØÒìÐÔÒýÎïÈýÖÖ£¬Ï±íΪÈýÖÖÒýÎïµÄ½éÉÜ£º

ÒýÎï ÊÊÓ÷¶Î§
Ëæ»úÒýÎï ÊÊÓÃÓÚ³¤µÄ»ò¾ßÓз¢¿¨½á¹¹µÄRNA¡£ÊÊÓÃÓÚrRNA¡¢mRNA¡¢tRNAµÈËùÓÐRNAµÄ·´×ªÂ¼·´Ó¦¡£Ö÷ÒªÓÃÓÚµ¥Ò»Ä£°åµÄRT-PCR·´Ó¦
Oligo-dT ÊÊÓÃÓÚ¾ßÓÐPolyAβ°ÍµÄRNA£¨Ô­ºËÉúÎïµÄRNA¡¢ÕæºËÉúÎïµÄrRNAºÍtRNA²»¾ßÓÐPolyAβ°Í£©
»ùÒòÌØÒìÐÔÒýÎï ÓëÄ£°åÐòÁл¥²¹µÄÒýÎÊÊÓÃÓÚÄ¿µÄÐòÁÐÒÑÖªµÄÇé¿ö

ÒýÎï×îºÃÑ¡ÔñOligo-dT»ò»ùÒòÌØÒìÐÔÒýÎËæ»úÒýÎï»á´ÓRNAµÄ¶à¸öλµã(°üÀ¨ºËÌÇÌåRNA)¿ªÊ¼×ªÂ¼£¬ÌØÒìÐԵ͡£Oligo-dTÒýÎïͬ´ó¶àÊýÕæºËϸ°ûmRNA3’¶ËµÄpoly(A)βÔÓ½»£¬ÓëʹÓÃËæ»úÒýÎïÏà±ÈÌØÒìÐԸߡ£µ«ÊÇOligo-dTÒýÎï¶ÔRNAÑùÆ·µÄÖÊÁ¿ÒªÇó½Ï¸ß£¬¶ÔÓÚ´Ó¸£¶ûÂíÁ̶ֹ¨µÄ×éÖ¯ÖÐÌáÈ¡µÄÁÓÖÊRNA²»ÊʺÏÓÃOligo-dTÒýÎï¡£

Äæת¼ø

Äæת¼øÊÇ´æÔÚÓÚRNA²¡¶¾ÌåÄÚµÄÒÀÀµRNAµÄDNA¾ÛºÏø¡£RT-PCRʵÑéÖеÄÄæת¼øÐèÒª¾ßÓÐÒÔ϶þÖÖ»îÐÔ£º

  1. ÒÀÀµRNAµÄDNA¾ÛºÏø»îÐÔ£ºÒÔRNAΪģ°åºÏ³ÉcDNAµÄµÚÒ»ÌõÁ´
  2. ÒÀÀµDNAµÄDNA¾ÛºÏø»îÐÔ£ºÒÔÒ»ÌõDNAÁ´ÎªÄ£°åºÏ³É»¥²¹µÄË«Á´DNA

ÔÚÑ¡ÔñÄæת¼øʱ£¬½¨ÒéÑ¡ÔñÎÞRNaseH¢Ù »îÐÔ£¨RNaseH-£©µÄÄæת¼ø¡£¾ßÓÐRNaseH»îÐÔµÄÄæת¼øµÄRNaseH»îÐÔ»áÓë¾ÛºÏø»îÐÔ¾ºÕùRNAÄ£°åÓëDNAÒýÎ»òcDNAÑÓÉìÁ´£©ÐγɵÄÔÓºÏÁ´£¬²¢½µ½âÔÓºÏÁ´ÖеÄRNAÁ´¡£±»RNaseH»îÐÔËù½µ½âµÄRNAÄ£°å²»ÄÜÔÙ×÷ΪºÏ³ÉcDNAµÄÓÐЧµ×Î½µµÍÁËcDNAºÏ³ÉµÄ²úÁ¿Ó볤¶È¡£

ʵÑéÁ÷³Ì

´Óϸ°û²ÄÁÏÖÐÌáÈ¡RNA¡úRNA¼ÓÈëµ½º¬ÓÐÄæת¼ø¡¢ÒýÎï¡¢dNTPsµÄ·´Ó¦ÌåϵÖСúÍË»ð£¬ÒýÎïÓëRNAÁ´Åä¶Ô¡úÑÓÉ죬Äæת¼øºÏ³É»¥²¹cDNAÁ´±äÐÔ¡ú³£¹æPCR·´Ó¦Á÷³Ì£¨±äÐÔ¡¢ÍË»ð¡¢ÑÓÉ죬Èç´Ë¶à´ÎÑ­»·£©¡£

RT-PCR¡°Á½²½·¨¡±Óë¡°Ò»²½·¨¡±

RT-PCRµÄʵÑé²Ù×÷·ÖΪ¡°Ò»²½·¨¡±Óë¡°Á½²½·¨¡±Á½ÖÖ¡£Ò»²½·¨RT-PCRÄÜ¿Ë¡΢Á¿mRNA¶ø²»Ðè¹¹½¨cDNAÎĿ⣨¼´cDNAºÏ³ÉÓëPCR·´Ó¦ÔÚͬһBuffer¼°Ã¸ÖнøÐУ¬Ò»²½·¨Íê³É£©£¬Ê¡ÂÔÁËcDNAÓëPCRÖ®¼äµÄ¹ý³Ì¡£Á½²½·¨RT-PCRÊ×ÏÈÓ÷´×ªÂ¼Ã¸ºÏ³ÉcDNA£¬È»ºóÒÔcDNAΪģ°å½øÐÐPCR£¬¼´RNA·´×ªÂ¼ÓëPCRÀ©Ôö·ÖÁ½²½½øÐС£Ò»²½·¨ÓëÁ½²½·¨¾ßÓÐÒÔÏÂÇø±ð£º

  • Ò»²½·¨±ÈÁ½²½·¨¸ü¿ìËÙ¡¢¼ò±ã¡¢¼õÉÙÁËÎÛȾ»ú»á¡¢¼õÉÙÁËRNA¶þ¼¶½á¹¹¡¢¼õÉÙÁËPCR·´Ó¦µÄ´íÅäÂÊ£»
  • Á½²½·¨µÄÓÅÊÆÔÚÓÚÖмä²úÎïcDNA£¬±ãÓÚ±£´æ£»ÇÒµÚ¶þ²½PCRֻȡÄæת¼·´Ó¦²úÎïµÄ1/10½øÐз´Ó¦£¬ÓÐÀûÓÚPCRÌõ¼þµÄµ÷Õû£¬ÊµÑéÖØÏÖÐÔÇ¿£»
  • Á½²½·¨¿ÉÒÔÔÚµÚ¶þ²½PCR·´Ó¦ÌåϵÖмÓÈëÌØÒìÐÔÒýÎÆäÁéÃô¶È±ÈÒ»²½·¨¸ß£»
  • Á½²½·¨°üÀ¨µÚÒ»Á´cDNAºÏ³ÉºÍËæºóµÄPCR·´Ó¦£¬ÈÝÒײúÉúÎÛȾÎÊÌ⣻
  • Á½²½·¨µÄʵÑéÔ¤ËãÒªµÍÓÚÒ»²½·¨¡£

RT-PCRÁ½²½·¨ÓëÒ»²½·¨±È½Ï

ͼ2£º¡°Ò»²½·¨¡±Óë¡°Á½²½·¨¡±±È½Ï

ʵÑé²Ù×÷×¢ÒâÊÂÏî

  • RNAÌáÈ¡Ò»¶¨ÒªÑ¸ËÙ£¬Ñù±¾ÒªÐÂÏÊ£¬×éÖ¯¾¡Á¿ÔÚÒºµªÖÐÑÐÄ¥£»
  • RNAÌáÈ¡ÍêÂíÉϽøÐÐÄæת¼²»ÒªÍÏÑÓ£¬ÐÂÌáµÄRNAºÜÈÝÒ×½µ½â£»
  • Äæת¼·´Ó¦¹ý³Ì£¬Ð轨Á¢ÎÞRNAase»·¾³£¬ÒÔ±ÜÃâÄ£°åRNA½µ½â£»

×¢£º

¢Ù RNaseÊÇRNAË®½âøµÄͳ³Æ£¬°üº¬RNase A£¬RNase HµÈ£¬RNase A¿ÉÒÔË®½âµ¥Ë«Á´RNA£¬RNase HÖ÷Ҫˮ½âRNAÓëDNAÔÓ½»Ë«Á´ÖеÄRNA

Ïà¹Ø·þÎñ

¸ü¶àÔĶÁ

²Î¿¼ÎÄÏ×

[1]ËïÏþ¶«£¬ÍõÑàÉ£Ã÷.Äæת¼PCR£¨RT-PCR£©ÊµÑé²Ù×÷Òªµã[J].ÏÖ´úÒ½Ò©ÎÀÉú£¬2009£¬25£¬13:2049-2049;
[2]³ÂÓàÅó£¬ÕÅÉù£¬³ÂÁÖݺ.RT-PCRÒ»²½·¨ÓëRT-PCRÁ½²½·¨±È½Ï[J].¸£½¨Ò½¿Æ´óѧѧ±¨£¬2003£¬10£¬37:100-102;
[3]StephenA.Bustin.QuantificationofmRNAusingreal-timereversetranscriptionPCR(RT-PCR):Trendsandproblems[J].Biomarkers£¬?2005£¬?10(6):429-438;
[4]¹ùÈôÁØ£¬¹ùÉÆÒ»£¬±«ÇïÒ°µÈ.¾ºÕùÐÔRT-PCR²â¶¨·¨¼°BMP-2mRNAµÄ¶¨Á¿¼ì²â[J].ÖйúÉúÎﻯѧÓë·Ö×ÓÉúÎïѧ±¨£¬2000£¬16£¬5:680-683;
[5]ÕÔÏþ£¬Âí»áÇÚ.ÆÏÌѹûʵ·¢ÓýºóÆڰ붨Á¿RT-PCRÄڲλùÒòµÄÓÅÑ¡[J]£¬ÖйúÅ©Òµ´óѧѧ±¨£¬2010£¬15£¬3:7-14;

¼¼Êõ×ÊÔ´

  • µ¥¿Ë¡¿¹ÌåרÌâ
    1. µ¥¿Ë¡¿¹Ìå¸ÅÄî
    2. µ¥¿Ë¡¿¹ÌåÖƱ¸¼¼Êõ
    3. µ¥Bϸ°û¿¹Ì忪·¢
    4. ¿¹ÌåÑÇÐͼø¶¨
  • ÖØ×鿹ÌåרÌâ
    1. scFv µ¥Á´¿¹Ìå
    2. Ë«ÌØÒìÐÔ¿¹Ìå
    3. ¿¹ÌåÈËÔ´»¯
    4. Ç׺ÍÁ¦³ÉÊì
  • µ°°×±í´ïרÌâ
    1. Ô­ºËµ°°×±í´ï
    2. ²¸È鶯Îïϸ°û±í´ï
    3. ½Íĸµ°°×±í´ï
    4. µ°°×±í´ïFAQ
  • µ°°×´¿»¯×¨Ìâ
    1. His±êÇ©Ç׺ʹ¿»¯
    2. Àë×Ó½»»»É«Æ×´¿»¯
    3. Äý½º¹ýÂËÉ«Æ×·¨
    4. µ°°×´¿»¯±êÇ©Ñ¡Ôñ
  • PCR¼¼ÊõרÌâ
    1. ʵʱӫ¹â¶¨Á¿PCR
    2. Äæת¼PCR
    3. RACE¼¼Êõ
    4. ³²Ê½PCR
  • µ°°×»¥×÷¼ì²âרÌâ
    1. ±íÃæµÈÀë×Ó¹²ÕñSPR
    2. ÉúÎïĤ¸ÉÉæBLI
    3. ÃâÒß¹²³ÁµíCo-IP
    4. Èںϵ°°×³Á½µGST Pull down
ad

Á¢¿Ìѯ¼Û

  • ÐÕÃû

  • ÁªÏµµç»°

  • ×ÉѯÏîÄ¿

  • ÑéÖ¤Âë

  • ÏîÄ¿ÃèÊö

Á¢¼´Ñ¯¼Û
  • ÐÕÃû

  • µ¥Î»

  • µç»°

  • ×ÉѯÏîÄ¿

  • ÑéÖ¤Âë

  • ÁôÑÔ:

¡¾ÍøÕ¾µØͼ¡¿¡¾sitemap¡¿
¡¾ÍøÕ¾µØͼ¡¿¡¾sitemap¡¿