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- ÌØÒìÐÔÒýÎï
- dNTP Mix
- PCR buffer
- ÈÈÆô¶¯Ã¸
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ÊÔ¼Á |
ÖÕŨ¶È |
buffer |
1x |
dNTPs |
<0.4mM |
Forward primer |
<0.4uM |
Reverse primer |
<0.4uM |
Template DNA |
<100ng |
ÈÈÆô¶¯Ã¸ |
5U |
ddH2O |
Up to 50 ul |
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- ÊÒÎÂÏÂÄý¹Ì40·ÖÖÓ×óÓÒ£¬Ð¡ÐİγöÊá×Ó£¬½«Äý½º·ÅÖõçÓ¾²ÛÖÐ×¼±¸µãÑù
- ÔÚµçÓ¾²ÛÖмÓÈëµçÓ¾»º³åÒº£¬Âþ¹ýÄý½º±íÃæ¼´¿É£¬µãÑù¿×ÄÚ²»ÒªÓÐÆøÅÝ
- ÑùÆ·µãÑùÇ°×¼±¸ºÃ£¬£¨ÔÚ°ËÁ¬¹ÜÖУ©¼ÓÈë5ulÑùÆ·£¬1ulµÄ6xLoding bufferºÍ1ulµÄȾÁÏ»ìºÏ£¬ÓÃÇÀ½«»ìºÏºóµÄÑùÆ·»º»º×¢Èëµ½µãÑù¿×ÖУ¬×¢Òâ²»Òª´®¿×
- °´ÕÕÕý¸º¼«£¨ºìÕýºÚ¸º£©£¬½ÓͨµçÔ´£¬µçѹ40-60V£¬Ê±¼ä30-40min£¬¿É¸ù¾Ýäå·ÓÀ¶µÄλÖÃÅжÏÊÇ·ñÖÕÖ¹µçÓ¾
- µçÓ¾½áÊø£¬¹Ø±ÕµçÔ´£¬Äý½º³ÉÏñ¹Û²ì£¬²¢¶Ô±ÈmarkerÈ·¶¨Æ¬¶Î´óС
²»Í¬µÄÇíÖ¬ÌÇŨ¶È·ÖÀ벻ͬ´óСµÄDNAƬ¶Î£º
ÇíÖ¬ÌǵÄŨ¶È/% |
0.3 |
0.5 |
0.7 |
1.0 |
1.2 |
1.5 |
2.0 |
DNA´óС/kb |
5-60 |
1-30 |
0.8-12 |
0.5-10 |
0.4-7 |
0.2-3 |
0.05-2 |
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- ÒýÎïµÄÉè¼ÆÔÚcDNAµÄ±£ÊØÇøÓò£¬ÔÚNCBIÉÏËÑË÷²»Í¬ÎïÖÖµÄͬһ»ùÒò£¬Í¨¹ýÐòÁзÖÎöµÄÈí¼þ£¬µÃµ½²»Í¬»ùÒòÏàͬµÄÐòÁоÍÊǸûùÒòµÄ±£ÊØÇø
- ÒýÎïµÄ³¤¶È£º15-28bp£¬³¤¶È´óÓÚ38bp£¬»áʹÍË»ðζÈÉý¸ß£¬²»ÀûÓÚÆÕͨTaqøµÄÀ©Ôö
- ÒýÎïGCº¬Á¿ÔÚ40%-60%£¬TmÖµ×îºÃ½Ó½ü72¡æ
- ÒòÃÜÂë×ӵļò²¢ÐÔ£¬ÒýÎïµÄ3¡¯¶Ë×îºÃ±Ü¿ªÃÜÂë×ӵĵÚÈý루×îºÃΪT£©
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- ÒýÎï×ÔÉí²»ÒªÐγɷ¢¼Ð½á¹¹£¬ÒýÎïÉè¼ÆÍê³É£¬ÒªBLASTÑéÖ¤
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¦ËDNA |
100pg-100ng |
ÖÊÁ£DNA |
100pg-10ng |
´ó³¦¸Ë¾ú»ùÒò×éDNA |
100pg-100ng |
ÈËÀà»ùÒò×éDNA |
10-200ng |
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- È¡1-2mlµÄ¾úÒº£¬12000rpmÀëÐÄ10min£¬È¥³ýÉÏÇ壬µÃµ½³Áµí
- ¸ù¾ÝµÃµ½³ÁµíÁ¿£¬¼ÓÈë500ul×óÓÒµÄTE£¨Åä·½ÈçÏ£©Ðü¸¡³Áµí£¬²¢¼ÓÈë20ulµÄÈܾúø£¬37¶È±£ÎÂ30min
- ¼ÓÈë30ul 10%µÄSDSºÍ1mgµ°°×øK£¬»ìÔȺó37¶È±£ÎÂ1h
- ¼ÓÈë120ul 5mol/lÂÈ»¯ÄÆ£¬³ä·Ö»ìÔÈ£¬65¶È·ÅÖÃ10min
- µÈÌå»ýµÄ·Ó£ºÂȷ£ºÒìÎì´¼£¨25:24:1£©³ä·Ö»ìÔÈ£¬12000rpmÀëÐÄ5min£¬µÃÉÏÇåÓڸɾ»µÄEP¹ÜÖÐ
- µÈÌå»ýµÄÂȷ£ºÒìÎì´¼£¨24:1£©³ä·Ö»ìÔÈ£¬12000rpmÀëÐÄ5min£¬µÃµ½ÉÏÇåÓڸϽôEP¹ÜÖÐ
- ¼ÓÈëµÈÌå»ýµÄÒìÎì´¼£¬³ä·Ö»ìÔÈ£¬-20¡æ·ÅÖÃ30minºó10000rpmÀëÐÄ5min
- È¥³ýÉÏÇ壬µÃµ½DNA³ÁµíÓÃ70%µÄÒÒ´¼Æ¯Ï´£¨¶¯×÷ÇáÈᣬ²»Òª½«³Áµí³åÆ𣩣¬Îü¸É£¬Í¨³£¿É»ñµÃ3-5ugµÄDNA
ÆäËû
- Taq DNA¾ÛºÏø£ºTaqøÖÖÀàÓкܶ࣬ÈÈÆô¶¯Ã¸£¬¸ß±£Õæø£¬¸ù¾Ý¸÷×ÔʵÑéµÄÓ¦ÓÃÑ¡ÔñºÏÊʵÄøÀ©Ôö£¬Ò»°ãµÄ·´Ó¦£¬»¯Ñ§ÐÞÊεÄÈÈÆô¶¯Ã¸¼´ÄܺܺõÄÍê³É£¬»¯Ñ§ÐÞÊÎÈÈÆô¶¯Ã¸Äܹ»±ÜÃâµÍÎÂÏÂÈκηÇÌØÒìÐÔ²úÎï²úÉú¡£Ã¸µÄŨ¶È¶ÔÀ©ÔöÓÐÒ»¶¨Ó°Ï죬øÓÃÁ¿¹ý¶à£¬»áµ¼Ö·ÇÌØÒìÐÔ²úÎ²Ù×÷°´ÕÕ˵Ã÷Êé¼´¿É¡£
- dNTP£ºËÄÖÖdNTPµÄŨ¶ÈÒªÏàͬ£¬ÆäÖÐÈκÎÒ»ÖÖŨ¶ÈÆ«¸ß»òÆ«µÍ£¬¶¼»áÒý·¢¼î»ùµÄ´íÎóÉøÈë¡£´ËÍ⣬dNTPÄܹ»ºÍÌåϵÖÐþÀë×Ó½áºÏ£¬´Ó¶øÓ°ÏìÌåϵÖÐþÀë×ÓµÄŨ¶È¡£
- »º³åÒº£º»º³åÒºÒ»°ãËæøÌṩ£¬Ò»°ãµÄPCRÊÔ¼ÁºÐ°üÀ¨Taqø£¬»º³åÒº£¬dNTP£¬Ë®¡£³õ´ÎÀ©Ôö£¬¿ÉÒÔÍêÈ«°´ÕÕÊÔ¼ÁºÐµÄ˵Ã÷Êé²Ù×÷£¬Èç¹ûÀ©Ôö½á¹ûÓÐÎÊÌ⣬¿É×Ô¼º³¢ÊÔÃþË÷ʵÑéÌõ¼þ»òÖØÐÂÉè¼ÆÒýÎïÌáÈ¡Ä£°åÀ©Ôö¡£
- Òò¿ÕÆøÖкÍÊÖÉÏÓÐÒ»¶¨ÎÛȾԴ£¬²Ù×÷¹ý³ÌÖÐÒª´÷ÊÖÌ×£¬Ôڸɾ»µÄ»·¾³ÖÐÅäÖ÷´Ó¦Ìåϵ£¬·ÀÖ¹¿ÕÆøÖеÄÎÛȾԴ¡£
- PCRÀ©ÔöµÄˮҪ¾¹ý¸ßѹÃð¾ú»ò0.2umÂËĤ¹ýÂË¡£
- ²úÎïÇнº»ØÊÕ¶þ´ÎÀ©ÔöÇ°£¬ÒªÏȼø¶¨£¬¶þ´ÎÀ©ÔöÄ£°åÏ¡ÊÍ1000±¶¡£
ËÄ£®³£ÓÃÊÔ¼ÁÅä·½
µçÓ¾»º³åÒº
- 50xTAE£¨pH8.5£©
׼ȷ³ÆÈ¡Tris 242g£¬EDTA£¨Na£©37.2gÓÚ1LÉÕ±ÖУ¬¼ÓÈë800mlÈ¥Àë×ÓË®£¬½Á°èÈܽ⣬½ÓÈë57.1mlÒÒËᣬ³ä·Ö½Á°è£¬µ÷pHÖµ8.5ºó¶¨ÈÝÖÁ1L£¬ÊÒα£´æ¡£Ã¿´ÎʹÓÃʱϡÊͼ´¿É¡£
- 10xTBE£¨pH8.3£©
׼ȷ³ÆÈ¡Tris 108g£¬EDTA 7.44g ÅðËá55gÓÚ1LµÄÉÕ±ÖУ¬¼Ó800mlÈ¥Àë×ÓË®£¬³ä·Ö½Á°èÈܽ⣬µ÷pH8.3ºó¶¨ÈÝÖÁ1L£¬ÊÒα£´æ¡£Ã¿´ÎʹÓÃÇ°Ï¡Êͼ´¿É¡£
ÉÏÑù»º³åÒº
6xLoding buffer
0.25%¶þ¼×±½Ç࣬0.25%äå·ÓÀ¶£¬30%¸ÊÓÍÈÜÓÚË«ÕôË®ÖУ¬4¡æ±£´æ¡£
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