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ÏßÐÔ»¯ÔØÌå | 50-100ng |
PCR²úÎï | X |
2¡ÁOne Step Cloning Mix | 10.0 |
RNase-Free water | ²¹ÖÁ20 |
×ÜÌå»ý | 20.0 |
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