½Íĸ˫ÔÓ½»ÏµÍ³£¨Yeast Two-Hybrid Technique£©ÊÇÓÉFieldsºÍSongÌá³öµÄ£¬ÔÚ½ÍĸÖÐÑо¿µ°°×¼äÏ໥×÷ÓõÄÒ»Öַdz£ÓÐЧµÄ·Ö×ÓÉúÎïѧ·½·¨£¬ÒÔÆä¼ò±ã¡¢ÁéÃô¡¢¸ßЧÒÔ¼°ÄÜ·´Ó³µ°°×¼äÔÚ»îϸ°ûÄÚµÄÏ໥×÷ÓõÈÌØµãµÃµ½¹ã·ºÓ¦Ó᣽ðÄê»á¡¤(ÖйúÇø)ÓµÓк˵°°×¼°Ä¤µ°°×½Íĸ˫ÔÓ½»Ë«ÖØÌåϵ£¬Ìṩ´Ó½ÍĸÎĿ⹹½¨£¬½ÍĸÎÄ¿âɸѡ£¬µã¶Ôµã½Íĸ˫ÔÓ½»Ñé֤һվʽ·þÎñ£¬¾Ñé·á¸»£¬×¨Òµ¼¼ÊõÈËÔ±Ò»¶ÔÒ»ÌṩΪÄú½â´ðÒÉÎÊ¡£
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Fig1. ºË½Íĸ˫ÔÓ½»ÏµÍ³»ù±¾ÔÀí
Ĥ½Íĸ˫ÔÓ½»ÏµÍ³ÊÊÓÃÓÚĤµ°°×¡¢¿ÉÈÜÐÔµ°°×»¥×÷Ñо¿£¬Í¨³£Ê¹Ó÷ÖÁÑ-·ºËØÏµÍ³£¨split-ubiquitin system£©¡£·ºËØÊÇÒ»¶ÎÄÜÓëµ°°×½áºÏ²¢½éµ¼µ°°×½µ½âµÄ¶ÌëÄ¡£¶à¸ö·ºËØ·Ö×Ó¹²¼Û½áºÏµ½°Ðµ°°×ÉÏÐγɶà¾Û·ºËØÁ´£¬·ºËØÌØÒìÐÔµ°°×øÒÔÒ»ÖÖ26Sµ°°×ø¸´ºÏÌåµÄÐÎʽʶ±ð²¢½µ½â°Ðµ°°×£¬Í¬Ê±½«·ºËØÊÍ·ÅÖÁ°ûÖÊ£¬½øÈëÏÂÒ»ÂÖÑ»·¡£·ÖÁÑ-·ºËØÏµÍ³ÕýÊǽ¨Á¢ÔÚÕâÒ»ÌØÐÔÖ®Éϵġ£ÔÚ¸ÃϵͳÖУ¬ÒÑÖªµ°°×XÓë·ºËØC¶ËµÄÒ»¶Î¶àëÄ£¨Cub£©Èںϱí´ï£¬´ýÑо¿°Ðµ°°×YÓë·ºËØN¶ËÒ»¶Î¾¹ýÐÞÊεĶàëÄ£¨NubG£©Èںϱí´ï¡£ÐÞÊÎʹµÃ·ºËØN¶ËµÄ¶àëIJ»ÄÜÕýÈ·ÕÛµþ£¬´Ó¶øÊ¹ÆäÎÞ·¨Óë·ºËØC¶ËµÄ¶àëĽáºÏÐγÉÍêÕûµÄ·ºËØ¡£Èç¹ûµ°°×XÓëµ°°×Y´æÔÚÏ໥×÷Ó㬴ø¶¯CubºÍNubÔÚ¿Õ¼äÉϽӽü£¬ÐγÉÍêÕû·ºËØ·Ö×Ó£¬Ê¹µÃUBPs¿ÉÒÔʶ±ð²¢½«·ºËØÓëÈںϱí´ïµÄת¼Òò×Ó·ÖÀ롣ת¼Òò×Ó½øÈëºËÄÚ£¬½øÒ»²½Æô¶¯±¨¸æ»ùÒòµÄ±í´ï¡£
Fig2. Ĥ½Íĸ˫ÔÓ½»ÏµÍ³»ù±¾ÔÀí
·þÎñ½×¶Î | ·þÎñÄÚÈÝ | ÖÜÆÚ | ¿Í»§Ìṩ | ½»¸¶ |
---|---|---|---|---|
ÑùÆ·RNAÌáÈ¡£¨¿ÉÑ¡£© |
|
2ÖÜ |
|
|
cDNAÎĿ⹹½¨ |
|
5ÖÜ | ||
ÔØÌå¹¹½¨ |
|
2~3ÖÜ | ||
½Íĸ¾úÖêת»¯ |
|
2~3ÖÜ | ||
×Ô¼¤»îÒÖÖÆ£¨¿ÉÑ¡£© |
|
1ÖÜ | ||
ÎÄ¿âɸѡ |
|
2ÖÜ | ||
ÑôÐÔ¿Ë¡²âÐò |
|
1ÖÜ | ||
»Ø×ªÑéÖ¤ |
|
1ÖÜ |
*ÑùÆ·ËÍÑùÒªÇó£ºÏ¸°û£¨¡Ý108 cells£©£»Ö²ÎïҶƬ×éÖ¯£¨¡Ý4 g£©£»Ö²Îï¸ù¾¥»òÖÖ×Ó£¨¡Ý8 g£©£»¶¯Îï×éÖ¯£¨¡Ý1 g£©£»×ÜRNA£¨¡Ý200 ¦Ìg£©£¬ËùÓÐÐèÒª³éÌáRNA»òRNAÑù±¾Ðè¸É±ùÔËÊä¡£
·þÎñ½×¶Î | ·þÎñÄÚÈÝ | ÖÜÆÚ | ¿Í»§Ìṩ | ½»¸¶ |
---|---|---|---|---|
ÔØÌå¹¹½¨ |
|
2~3ÖÜ |
|
|
½Íĸ¾úÖêת»¯ |
|
2~3ÖÜ | ||
Ï໥×÷ÓÃÑéÖ¤ |
|
2~3ÖÜ |