ÖØ×鿹Ìå±í´ïʵÑé°¸Àý
¸ÅÊö£º±¾ÎÄΪÖØ×鿹Ìå±í´ï°¸Àý½éÉÜ£¬½éÉÜÁËÍêÕûµÄÖØ×鿹Ìå±í´ïʵÑéÁ÷³Ì£¬°üÀ¨ÊµÑéÉè¼Æ¡¢ÖÊÁ£³éÌá¡¢CHOϸ°û¸´ËÕ¡¢CHOϸ°ûתȾ¡¢ÖØ×鿹Ìå´¿»¯¼°Îȶ¨ÐÔ¼ì²âµÈʵÑé²½Öè¼°¸÷¸ö²½ÖèµÄÏêϸ²Ù×÷Á÷³Ì¡£
µÚÒ»²¿·Ö ʵÑéÉè¼Æ
¸Ã°¸ÀýΪ½ðÄê»á¡¤(ÖйúÇø)ÖØ×鿹Ìå±í´ï·þÎñµÄÒ»¸öÏîÄ¿,²ÉÓýðÄê»á¡¤(ÖйúÇø)×îпª·¢µÄÃÜÂë×ÓÓÅ»¯Èí¼þMaxCodonTM Optimization Program (V13)¶ÔÌṩµÄÖØ×鿹ÌåH£¨ÒÔϼò³ÆrAb-H£©µ°°×°±»ùËáÐòÁнøÐÐÓÅ»¯£¬²ÉÓÃÈ«»ùÒòºÏ³É²¢Í¨¹ý˫øÇз¨½«½«rAb-H»ùÒò²åÈëµ½±í´ïÔØÌåproEMÖУ¬²¢Í¨¹ýøÇз¨ºÍ²âÐòÈ·ÈÏ×îÖÕ±í´ïÔØÌåµÄ׼ȷÐÔ£¬×îÖÕתµ½DH5a¿Ë¡¾úÖêÖУ¬Í¨¹ýÖÊÁ£´ó³éÊÔ¼ÁºÐÌáȡתȾ¼¶ÖÊÁ££¬Ö®ºó½«ÖÊÁ£Í¨¹ýתȾÊÔ¼ÁתȾµ½²¸È鶯Îïϸ°ûCHOÖнøÐÐ˲ʱ±í´ï£¬ÔÚͨ¹ýProtein AÇ׺ͲãÎö´¿»¯rAb-Hµ°°×¡£
µÚ¶þ²¿·Ö ÖØ×鿹ÌårAb-HÔÚ²¸È鶯ÎïϵͳÖбí´ïÓë´¿»¯
Ò»¡¢×ªÈ¾¼¶ÖÊÁ£À©Ôö³éÌá
- rAb-HÖÊÁ£×ª»¯DH5a
- ·Ö±ðÎüÈ¡rAb-HµÄLight ChainºÍHeavy Chain±í´ïÖÊÁ£80-100ng¼ÓÈëÒÑÖƱ¸µÄDH5a¸ÐÊÜ̬ϸ°ûÖÐ;
- ½«¼ÓÈëÖÊÁ£ºóµÄ¸ÐÊÜ̬ϸ°ûͨ¹ýÈȼ¤42¡æ£¬90sת»¯;
- ½«×ª»¯ºóµÄ¸ÐÊÜ̬ϸ°û¼ÓÈë LBÒºÌåÅàÑø»ù£¬·ÅÈëÒ¡´²37¡æ£¬200rpmÕðµ´ÅàÑøÔ¼30nim;
- ½«ÅàÑøºóµÄ¸ÐÊÜ̬ϸ°ûÈ¡³ö£¬ÎüÈ¡²¿·ÖÐüҺͿÔÚº¬Óа±Üп¹ÐÔµÄƽ°åÉÏ£¬·ÅÈëÅàÑøÏ䣬37¡æ£¬¹ýÒ¹ÅàÑø;
- ´ÓÐÂÏʵÄÅàÑø°åÖÐÌôÈ¡µ¥¿Ë¡ÓÚ2-5mL?LBÅàÑø»ù£¬37¡æ£¬200rpmÅàÑø8h;
- °´1/500±ÈÀý½ÓÖÖÓÚ200mL LBÅàÑø»ùÖУ¬37¡æ£¬200rpmÅàÑø16h;
- ÊÕ¼¯ÅàÑøºóµÄ¾úÒºÀëÐÄ£¬È¥µôÉÏÇå.
- rAb-HÖÊÁ£³éÌᣨQiagenתȾ¼¶ÖÊÁ£³éÌáÊÔ¼ÁºÐ£©
- 1%ÇíÖ¬ÌÇÄý½º·ÖÎö³éÌáµÄrAb-HÖÊÁ££¬½á¹ûÈçÏ£º
- תȾ¼¶ÖÊÁ£DNAÖÊÁ£ÖÊÁ¿²â¶¨
¼ì²âÄÚÈÝ |
תȾ¼¶ÖÊÁ£±ê×¼ |
Light ChainÖÊÁ£¼ì²â½á¹û |
Heavy ChainÖÊÁ£¼ì²â½á¹û |
A260/A280 |
1.8-2.0 |
1.86 |
1.85 |
ÄÚ¶¾ËØ |
ÄÚ¶¾ËØ<50EU/mg |
ö×ÊÔ¼Á¼ì²â£¬<50EU/mg |
ö×ÊÔ¼Á¼ì²â£¬<50EU/mg |
ÎÞ¾ú¼ì²â |
ÎÞ¾ú |
LBƽ°å¼ì²â£¬ÎÞ¾úÂä |
LBƽ°å¼ì²â£¬ÎÞ¾úÂä |
¶þ¡¢CHOϸ°û¸´ËÕÓë´«´ú
- ÌáÇ°½«Ë®Ô¡¹ø´ò¿ª37¡æ£»ÅàÑø»ùÌáÇ°ÔÚ37¡æÔ¤ÈÈ;
- ´ÓÒºµª¹ÞÖÐÈ¡³ö¶³´æµÄCHOϸ°û£»
- °Ñ¶³´æϸ°ûÁ¢¼´Í¶Èë37¡æˮԡ¹øÖУ¬Çá΢ҡ¶¯Ê¹Æä¿ìËÙÈÚ»¯£¨Ô¼1min£©£¬È¡³ö£»
- ÓÃ75%ÒÒ´¼Ïû¶¾¹ÜÍâ±Ú£¬·ÅÈëÉúÎﰲȫ¹ñÄÚ,תÒƵ½º¬10mLÅàÑø»ùµÄ 15mLÀëÐĹÜÖУ¬ÀëÐÄ800 rpm£¬5 min£»
- ÀëÐĺóµÄϸ°ûÈ¥µôÉÏÇ壬ȡÉÙÐíÐÂÏÊÅàÑø»ùÖØÐüϸ°û£¬ÔÙתÒƵ½ÅàÑøÆ¿ÖУ¬¼ÓÈëÐÂÏÊÅàÑø»ùÇáÇáÒ¡¶¯£¬Ê¹Ï¸°û·ÖÉ¢¾ùÔÈ£¬È¡Ï¸°û¼ÆÊý¼°»îÁ¦¼ì²â£¬Ê¹ÃܶȿØÖÆÔÚ3-4¡Á105 cells/mL£¬»îÁ¦>95%£»
- ÖÃÓÚÅàÑøÏäÖÐ110rpm£¬37¡æ£¬5% CO2ÅàÑø£»
- ϸ°ûÅàÑø2-3Ì죬Ãܶȴﵽ2.0¡Á106 cells/mL ×óÓÒʱÐè¶Ôϸ°û½øÐд«´ú£»
- ´ÓÅàÑøÆ¿ÖÐÈ¡³ö²¿·ÖÅàÑøÎïÆúµô£¬ÔÙÏòÅàÑøÆ¿Öв¹¼ÓÐÂÏÊÅàÑø»ù£¬¶ÔÊ£ÓàµÄϸ°ûÅàÑøÎïÏ¡ÊÍ£¨ÁôϵÄϸ°ûÅàÑøÎï¸ù¾Ýϸ°ûÃܶȡ¢ÅàÑøÌå»ý¡¢Ï¡ÊͺóÃܶȵȶø¶¨£©£»
- ·ÅÈëÅàÑøÏäÖÐ110rpm£¬37¡æ£¬5%CO2£¬¼ÌÐøÅàÑø£»
- ÿÌìÐè¶Ôϸ°ûÃܶȼ°»îÁ¦¼ì²â£¬µ±Ï¸°ûÃܶȴﵽ2¡Á106 cells/mL×óÓÒʱ£¬Òª¶Ôϸ°û½øÐд«´ú£»
Èý¡¢rAb-HÖÊÁ£×ªÈ¾CHOϸ°û
- תȾǰ2Ì콫CHOϸ°ûÐü¸¡ÅàÑøÖÁ1.5 L£¬½ÓÖÖÃܶÈΪ4 – 5¡Á105 cells/mL£¬ÖÃÓÚÅàÑøÏäÖÐ110rpm£¬37¡æ£¬5% CO2ÅàÑø£»
- תȾµ±Ììʹϸ°ûÃܶȿØÖÆÔÚ1.5-2¡Á106 cells/mL£»
- ½«×ªÈ¾»º³åÒº¡¢×ªÈ¾ÊÔ¼ÁµÈÊÔ¼ÁÌáÇ°·ÅÈëÅàÑøÏä»òˮԡ¹ø37¡æÔ¤ÈÈ(10-20min)£»£¨×ªÈ¾·½·¨½éÉÜ£©
- DNA-תȾÊÔ¼Á»ìºÏÎÏòתȾ»º³åÒºÖмÓÈëLight ChainºÍHeavy Chain±í´ïÖÊÁ£ºÍתȾÊÔ¼Á»ìÔÈ£¬37¡æÎÂÓý10min£»
- ½«DNA-תȾÊÔ¼Á»ìºÏÎï¼ÓÈë´ýתȾϸ°ûÖУ¬·ÅÈëÅàÑøÏäÖÐ110rpm£¬37¡æ,5%CO2ÅàÑø£»
- ÊÕ¼¯£º×ªÈ¾ºóÔ¼5-6Ì죬ȡ³öϸ°ûÅàÑøÎÀëÐÄ£¬ÊÕ¼¯ÉÏÇå»òϸ°û£»
ËÄ¡¢rAb-H ´¿»¯
- ȡתȾÅàÑø6ÌìºóµÄϸ°ûÅàÑøÒºÀëÐÄ£¬ÉÏÇåÓÃ0.22umĤ¹ýÂË£¬ÔÚ4¡æ»·¾³ÏÂ͸ÎöÖÁ»º³åÒº20 mM Na2HPO4£¬150 mM NaCl£¬pH 7.0ÖУ¬Í¸Îö½áÊøºóÔÙÓÃProtein AÖù´¿»¯£¬½á¹ûÈçÏ£º

¾Protein AÇ׺ͲãÎö´¿»¯£¬Ä¿±êµ°°×rAb-HÖ÷Òª´æÔÚÓÚÏ´ÍÑ×é·ÖLane 4-6ÖУ¬ÊÕ¼¯ÉÏÊöÄ¿±êµ°°×£¬²¢½«Æä͸Îöµ½1XPBS, 10% Glycerol, pH7.4ÖÐ,͸Îö½áÊøºóÓÃ0.22umĤ¹ýÂË£¬²¢·Ö×°¶³ÓÚ-80¡æ
µÚÈý²¿·Ö ÖØ×鿹ÌårAb-Hµ°°×Öʼì
- rAb-HÎȶ¨ÐÔ²âÊÔ£¨¶³ÈÚʵÑ飩
È¡Ò»Ö§·Ö×°ºó¶³ÓÚ-80¡æµÄrAb-Hµ°°×£¬·ÅÖÃÓÚ±ùË®»ìºÏÎïÖдýÆ仺ÂýÈÚ»¯£¬ÈÚ»¯ºóÎÞÒì³£ÏÖÏó£¬ËµÃ÷rAb-Hµ°°×¶³ÈÚʵÑéÊÇÕý³£µÄ¡£
¸ü¶àÔĶÁ
ÖØ×鿹Ìå±í´ïרÌâ